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LWnt-3A細胞公司相關(guān)產(chǎn)品:凝血因子11重鏈抗體IL-2/FITC 熒光素標記白介素2抗體IgG凝血因子12輕鏈抗體IL-2/FITC 熒光素標記白介素2抗體(人) IgG
產(chǎn)品分類(lèi)
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注意事項:
盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復凍融5次對于其檢測效果無(wú)顯著(zhù)影響,但為取得良好的使用效果,3-6個(gè)月內推薦4℃保存,并適當注意避免反復凍融。
如果有細菌或真菌污染,會(huì )嚴重影響檢測效果。
染色后宜盡快檢測,時(shí)間過(guò)長(cháng)可能會(huì )導致凋亡或壞死細胞的數量增加。
如果細胞收集過(guò)程中使用了胰酶,需注意設法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會(huì )消化并降解Annexin V-FITC,導致染色失敗。
熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅,在進(jìn)行熒光觀(guān)察時(shí),盡量縮短觀(guān)察時(shí)間,同時(shí)在操作和存放過(guò)程中也盡量注意避光保存。
用于流式細胞儀檢測時(shí),如果發(fā)現Annexin V-FITC單獨染色時(shí)出現了過(guò)多的PI假陽(yáng)性細胞,并且通過(guò)調整相關(guān)設置和參數也無(wú)法改善,可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測,這樣通??梢杂行p少假陽(yáng)性的壞死細胞。
需自備PBS。
本產(chǎn)品于專(zhuān)業(yè)人員的科學(xué)研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內。
為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。
產(chǎn)品名稱(chēng):小鼠皮下結締組織細胞
英文簡(jiǎn)稱(chēng):LWnt-3A細胞
貨號:LZ-X969433
規格:T25
生長(cháng)特性:貼壁
我司常期代理ATCC Acris abcam cst Biorbyt santa Novus sigma lifespan NEB roche ABI R&D millipore BD Qiagen Cayman Jackson Life GeneTex Bio-Rad DSHB tocris peprotech 等品牌;部分產(chǎn)品現貨,公司產(chǎn)品僅用于科研超低比價(jià),產(chǎn)品貨期短,價(jià)格優(yōu),售后齊全。
凍存培養基:
凍存細胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養基。凍存培養基中應含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專(zhuān)門(mén)配制的*凍存培養基。
1)細胞凍存培養基是一種用于哺乳動(dòng)物細胞的即用型*凍存培養基,其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過(guò)優(yōu)化,可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果。
2)凍存培養基是一種化學(xué)成分確定的、無(wú)蛋白、無(wú)菌凍存培養基,含10% DMSO,適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。
培養細胞凍存方案:
以下實(shí)驗方案介紹了培養細胞凍存的一般流程。詳細的實(shí)驗方案,必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)。
1.配制凍存培養基,于2°C至8°C下儲存,直至使用。請注意使用何種凍存培養基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時(shí),利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細胞從組織培養容器上脫離下來(lái)。用該細胞所需*培養基重新懸浮細胞。
3.采用、細胞計數儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動(dòng)細胞計數儀測定總細胞數和活細胞百分比。根據所需活細胞密度,計算凍存培養基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無(wú)菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動(dòng)細胞沉淀。
注:離心速度和時(shí)間取決于細胞種類(lèi)。
5.用預冷的凍存培養基重新懸浮細胞沉淀,將其調整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí),應不時(shí)輕輕混合細胞,使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞,使溫度每分鐘大約降低 1°C?;蛘?,將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過(guò)夜。
實(shí)驗報告:
一、分離與培養:
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;
5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實(shí)驗需要接種于6孔板中繼續培養;
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長(cháng)至80%融合時(shí),棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過(guò)夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微
鏡下觀(guān)察圖像并拍照。
實(shí)驗材料:
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養液1瓶;8ml小牛血清(FCS) 1瓶;100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶;PBS(-)1 瓶
2. 100ml滅菌燒杯2個(gè);
3、50ml離心筒2個(gè)
4、滅菌培養皿1個(gè),細胞培養瓶1個(gè)
5、1ml ,200μl移液器各1支;槍頭盒2個(gè);無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè)
6、細胞計數板1塊;
7、滅好菌的鑷子1把,剪刀1把;
8、酒精燈1臺;
嗜熱脂肪地芽孢桿菌雪膽乙素;Dihydrocucurbi伊紅美藍瓊脂EMB人瘤病16型E7抗體
芽孢桿菌香蜂草苷;didymin培養基膠質(zhì)谷氨酸運載蛋白1抗體
變異鏈球菌香葉木素-7-O-葡萄糖苷;Diosme伊紅美藍瓊脂平板EB病編碼核蛋白-3抗體
血鏈球菌新芒果苷;neomangiferin蛋白胨水內皮素轉化酶1ECE1抗體
醋酸醋桿菌香紫蘇內酯;clareolideKovacs氏靛基質(zhì)試劑食道癌相關(guān)基因抗體
伊氏李斯特氏菌香草酸;Vanillicacid革蘭氏染色液外基質(zhì)蛋白1抗體
英諾克李斯特氏菌夏佛塔苷;Schaftoside十六烷基基溴化銨培養基外胚層發(fā)育不良抗體
紅曲霉小白菊內酯;Parthenolide乙酰培養基表皮生長(cháng)因子受體抗體
不動(dòng)桿菌熊去氧膽酸;Ursodeoxycholi綠膿菌素測定培養基PDP基礎表皮生長(cháng)因子受體-8抗體
食酸菌柚皮甙二氫查爾酮;Naringindi甘油早期反應基因-1/應急反應生長(cháng)基因1抗體
短波單胞菌血根堿;Sanguinarine綠膿菌素測定用培養基PDP斜面限供汽運表皮膜蛋白1抗體
多頭霉香葉木素;Diosmetin培養基抗內膜抗體
掘氏疫霉仙茅苷;Curculigoside明膠生化管內皮抑素/內皮他丁抗體
煙草疫霉腺苷;Adenosine明膠培養基上皮粘附分子/表皮粘附分子抗體
副球菌西貝母堿;Imperialine硝酸鹽蛋白胨水培養基大腸埃希桿菌O抗體
LWnt-3A細胞褪黑素受體1B抗體麥冬(標準品) (R)-(-)-1,1'-Binaphthyl-2,2'-diyl hydrogenphosphate
多藥耐藥相關(guān)蛋白4抗體麥冬苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖(1→2)-β-... 2,6-Dichloropurine
多藥耐藥相關(guān)蛋白5抗體麥冬內酯A 2,4-Dichloroquinazoline
線(xiàn)粒體內膜蛋白抗體麥冬皂苷D 9-(Chloromethyl)anthracene
質(zhì)金屬蛋白酶-8/膠原酶2抗體麥冬皂苷D(標準品) Ethyl ferulate
質(zhì)金屬蛋白酶11抗體麥冬皂苷D(標準品) CAPS
質(zhì)金屬蛋白酶-12抗體麥角甾;麥角固(標準品) Crotonoside
質(zhì)金屬蛋白酶-15抗體麥芽(標準品) Brazilin
質(zhì)金屬蛋白酶-16抗體滿(mǎn)山白(標準品) Sarsasapogenin