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單寧含量測試盒(微量法)公司正在出售的產(chǎn)品:3,4-二氫嘧衍Monastrol(K-ATPase 抑制劑)間充質(zhì)干培養小鼠抗IgE受體抗體ELISA試劑盒,細胞αSMA表達流式細胞儀檢測試劑盒10/20次間充質(zhì)干培養小鼠熱休克90(HSP-90)ELISA試劑盒,載玻片細胞αSMA表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20次間充質(zhì)干成骨分化培養小鼠胰島受體β(ISR-β)ELISA試劑盒,
產(chǎn)品分類(lèi)
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公司產(chǎn)品僅供科研使用,下列是產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱(chēng) | 英文名稱(chēng) | 規格 | 貨號 |
單寧含量測試盒(微量法) | 100管/96樣 | LZ-01X8380 |
商品介紹:
測定意義:
單寧是一類(lèi)廣泛存在于植物體內的多元酚化合物,又稱(chēng)植物多酚。具有*的化學(xué)性質(zhì)和多種生理活性,如能與蛋白質(zhì)、生物堿、多糖結合;能與多種金屬離子發(fā)生絡(luò )合或靜電作用;具有止血、抑制微生物、抗過(guò)敏、抗突變、抗腫瘤、抗衰老等生理活性。
測定原理:
單寧在堿性環(huán)境下與磷鉬酸反應,生成藍色化合物,在760nm處有大吸收峰。
需自備的儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計、水浴鍋、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽和蒸餾水。
注意事項:
①加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說(shuō)明書(shū)中標明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應揮發(fā),避免長(cháng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對光敏感,避免長(cháng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗完成后應立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標板時(shí)應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器。
⑦實(shí)驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應按標簽說(shuō)明書(shū)儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過(guò)后的標準品應丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
實(shí)驗步驟:
(1)實(shí)驗開(kāi)始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養獲得的菌絲用真空抽濾即可!固體培養就更好說(shuō)了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過(guò)夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無(wú)水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質(zhì)量
(在抽提過(guò)程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數)
ALCAM Protein Rat 重組大鼠 ALCAM / CD166 蛋白 (His 標簽)
Actin Alpha /Alpha-SMA (Actin alpha , smooth muscle aorta 0.5mgActin Alpha /Alpha-SMA (Actin alpha , smooth muscle aorta) 肌動(dòng)蛋白(抗原)
ENPP2重組小鼠 Autotaxin / ENPP2 / NPP2 蛋白 (His 標簽) Protein
FCGR3A Protein Human 重組人 CD16a / FCGR3A 蛋白 (176 Val, His 標簽)
ANTXR1重組人 ANTXR1 蛋白 (Fc 標簽) Protein
IL12B重組大鼠 IL12B / IL-12B 蛋白 (His 標簽) Protein
EGFL7(EGF-like domain containing protein 7 0.5mgEGFL7(EGF-like domain containing protein 7) 類(lèi)表皮生長(cháng)因子域7抗原
ITGA8 & ITGB1重組人 ITGA8 & ITGB1 Heterodimer 蛋白 Protein
NRG1 Protein Human 重組人 NRG1-alpha 蛋白 (ECD, Fc 標簽)
HPX Protein Mouse 重組小鼠 Hemopexin / HPX 蛋白 (His 標簽)
EGFL7(EGF-like domain containing protein 7 0.5mgEGFL7(EGF-like domain containing protein 7) 類(lèi)表皮生長(cháng)因子域7抗原
NRG1 Protein Human 重組人 NRG1-alpha 蛋白 (ECD, Fc 標簽)
IL12B重組大鼠 IL12B / IL-12B 蛋白 (His 標簽) Protein
HPX Protein Mouse 重組小鼠 Hemopexin / HPX 蛋白 (His 標簽)
ITGA8 & ITGB1重組人 ITGA8 & ITGB1 Heterodimer 蛋白 Protein
FCGR1 Protein Rat 重組大鼠 CD64 / FCGR1A 蛋白 (His 標簽)
Dickkopf相關(guān)蛋白2(DKK2)重組蛋白 Recombinant Dickkopf Related Protein 2 (DKK2)
IFNG重組小鼠 IFNG / Interferon Gamma 蛋白 (Fc 標簽) Protein
ANGPT4重組人 Angiopoietin 4 / ANG4 / ANGPT4 蛋白 (His 標簽) Protein
SCGN Protein Human 重組人 SCGN / Secretagogin 蛋白 (His 標簽)
單寧含量測試盒(微量法)dog IgG/RBITC 羅丹明標記狗IgG 0.3ml
LRRC15 英文名稱(chēng): 富含亮酸重復蛋白15抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Dnmt3 Beta DNA甲基轉移酶-3β抗體 規格 0.2ml
ACA-IgG(Mouse anti-cardiolipin antibody IgG) ELISA Kit 小鼠抗心磷脂抗體IgGMulti-class antibodies規格: 48T
赭曲霉A檢測試劑盒 96孔/盒 糧食作物(玉米、大米、豆類(lèi)、花生、麥類(lèi)等)、、飼料等
Anti-CK5/6 /FITC 熒光素標記細胞角蛋白5/6抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
操作程序:
注意:最重要的是及時(shí)固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC處理,以抑制RNA酶對mRNA的分解作用。此外,過(guò)度固定對原位雜交有明顯的不利影響。
1.玻片的處理:一般采用多聚賴(lài)氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.細胞在多聚賴(lài)氨酸處理的蓋玻片上進(jìn)行培養,條件為37℃和5%的CO2,所用培養基為Dulbecco基礎培養基。細胞長(cháng)好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分鐘×3次。
3.培養細胞和冰凍切片均可用下述方法固定:固定液為4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室溫固定 20--30分鐘。蒸餾水充分洗滌,干燥后-20℃冰凍可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+純甲醇50份混合,室溫處理30分鐘。蒸餾水洗滌3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%檸檬酸新鮮稀釋1ml 3% 檸檬酸加2滴濃縮型,混勻),37℃或室溫消化5—120秒鐘。有時(shí)也可以不消化。原位雜交用 PBS洗3次×5分鐘。蒸餾水洗1次。
6.后固定:消化后才需要。固定液為1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室溫固定 10分鐘。蒸餾水洗滌3次。
7.預雜交:濕盒的準備——干的雜交盒底部加20%甘油20ml以保持濕度。按每張切片20μι加預雜交液。恒溫箱38-42℃2—4小時(shí)。吸取多余液體,不洗。
8.雜交——按每張切片20μι雜交液,加在切片上。將原位雜交專(zhuān)用蓋玻片的保護膜揭開(kāi)后,蓋在切片上。恒溫箱38-42℃雜交過(guò)夜(根據雜交情況可以調節)。
9.雜交后洗滌:揭掉蓋玻片,37℃左右水溫的2×SSC洗滌5分鐘×2次;37℃0.5×SSC洗滌15分鐘×1次; 37℃0.2×SSC洗滌15分鐘×1次(如果有非特異性染色,重復0.2×SSC洗滌15分鐘×1-2次)。
10.滴加封閉液:37℃30分鐘。甩去多余液體,不洗
11.滴加化鼠抗*:37℃ 60分鐘或室溫120分鐘。原位雜交用PBS洗5分鐘×4次。勿用其它緩沖液和蒸餾水洗滌。
12.滴加SABC:37℃20分鐘或室溫30分鐘。原位雜交用PBS洗5分鐘×3次。勿用其它緩沖液和蒸餾水洗滌。
13.滴加化過(guò)氧化物酶:37℃20分鐘或室溫30分鐘。原位雜交用PBS洗5分鐘×4次。
14.DAB顯色:使用DAB顯色試劑盒—1ml蒸餾水加顯色劑A,B,C各一滴,混勻,加至標本上。一般顯色20-30分鐘。若無(wú)背景出現則可繼續顯色。也可自配DAB顯色劑后顯色。充分水洗。
15.必要時(shí)蘇木素復染,充分水洗。
16.酒精脫水,二甲苯透明,封片。