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細胞凋亡DNA Ladder提取試劑盒(柱式吸附)公司正在出售的產(chǎn)品:G蛋白偶聯(lián)受體18抗體MCM5/CDC46/FITC 熒光素標記微小染色體維持缺陷蛋白5抗體IgGG蛋白偶聯(lián)受體119抗體MCM7/FITC 熒光素標記微小染色體維持缺陷蛋白7抗體IgG人異質(zhì)型核糖核復合物/抗RA33抗體(hnRNP/RA33)ELISA試劑盒樣本鈣鎂平衡鹽(PBS)緩沖溶液人單純皰疹病毒抗原2(HS
產(chǎn)品分類(lèi)
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商品介紹:
本試劑盒是目前先進(jìn)的DNA Ladder抽提試劑盒之一。本試劑盒是針對細胞凋亡過(guò)程中產(chǎn)生的核小體間DNA鏈斷裂而設計的??梢苑浅S行У爻樘嵝∑螢?80-200bp的DNA ladder,同時(shí)又可以抽提到大50kb左右的基因組DNA。本試劑盒可以抽提50個(gè)樣品。
DNA ladder也稱(chēng)DNA fragmentation,是細胞凋亡的一個(gè)重要指標。通常觀(guān)察到DNA ladder,就可以判定細胞發(fā)生了凋亡。
樣品首先被蛋白酶K消化,隨后加入適合DNA結合到純化柱上的緩沖液,然后加入到純化柱內。通過(guò)高速離心,使DNA在穿過(guò)純化柱的瞬間,結合到純化柱上,隨后通過(guò)兩次洗滌去除各種雜質(zhì),后通過(guò)洗脫液把DNA洗脫下來(lái)。整個(gè)過(guò)程無(wú)需酚氯仿抽提,無(wú)需酒精沉淀,樣品裂解后僅需約15分鐘即可完成。
通過(guò)DNA純化柱方式抽提DNA ladder比用傳統的酚氯仿抽提酒精沉淀方法更加便捷,小片段DNA不容易損失。試劑盒提供了RNase A,可以獲得不含RNA的高純度總DNA,排除了RNA對DNA ladder觀(guān)察造成的干擾。
本試劑盒每次多可以抽提20mg組織或200-350萬(wàn)個(gè)培養細胞。樣品用量過(guò)多,反而會(huì )影響抽提效果。純化柱對于DNA的大容量約為30微克。通常每200萬(wàn)Hela細胞或500萬(wàn)淋巴細胞可以抽提得到15-25微克總DNA,每25mg肝、腦、腎組織可以抽提得到10-30微克總DNA,每25毫克心、肺組織可以抽提得到5-10微克總DNA,每10mg脾組織可以抽提得到5-30微克總DNA。樣品的用量請勿超過(guò)純化柱的容量,樣品用量好能保持在純化柱容量的70%或以下。當然過(guò)少的樣品也不利于檢測到DNA ladder。
對于培養細胞的凋亡檢測,通常6孔板一個(gè)孔的細胞就足夠用于DNA ladder的抽提和檢測。
試劑盒組份:
樣品裂解液A——————10ml
樣品裂解液B——————11ml
洗滌液I——————21ml(第一次使用前加入7ml無(wú)水乙醇)
洗滌液II——————16ml (第一次使用前加入24ml無(wú)水乙醇)
洗脫液——————22ml
蛋白酶K——————1.1ml
RNase A——————220μl
DNA純化柱及廢液收集管——————50套
儲存條件:室溫,有效期一年。( 蛋白酶K需-20℃保存)
公司產(chǎn)品僅供科研使用,下列是產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱(chēng) | 英文名稱(chēng) | 規格 | 貨號 |
細胞凋亡DNA Ladder提取試劑盒(柱式吸附) | DNA Ladder Extraction Kit with Spin Column | 50次 | LZ-01X6326 |
實(shí)驗步驟:
(1)實(shí)驗開(kāi)始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養獲得的菌絲用真空抽濾即可!固體培養就更好說(shuō)了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過(guò)夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無(wú)水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質(zhì)量
(在抽提過(guò)程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數)
操作程序:
注意:最重要的是及時(shí)固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC處理,以抑制RNA酶對mRNA的分解作用。此外,過(guò)度固定對原位雜交有明顯的不利影響。
1.玻片的處理:一般采用多聚賴(lài)氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.細胞在多聚賴(lài)氨酸處理的蓋玻片上進(jìn)行培養,條件為37℃和5%的CO2,所用培養基為Dulbecco基礎培養基。細胞長(cháng)好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分鐘×3次。
3.培養細胞和冰凍切片均可用下述方法固定:固定液為4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室溫固定 20--30分鐘。蒸餾水充分洗滌,干燥后-20℃冰凍可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+純甲醇50份混合,室溫處理30分鐘。蒸餾水洗滌3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%檸檬酸新鮮稀釋1ml 3% 檸檬酸加2滴濃縮型,混勻),37℃或室溫消化5—120秒鐘。有時(shí)也可以不消化。原位雜交用 PBS洗3次×5分鐘。蒸餾水洗1次。
6.后固定:消化后才需要。固定液為1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室溫固定 10分鐘。蒸餾水洗滌3次。
7.預雜交:濕盒的準備——干的雜交盒底部加20%甘油20ml以保持濕度。按每張切片20μι加預雜交液。恒溫箱38-42℃2—4小時(shí)。吸取多余液體,不洗。
8.雜交——按每張切片20μι雜交液,加在切片上。將原位雜交專(zhuān)用蓋玻片的保護膜揭開(kāi)后,蓋在切片上。恒溫箱38-42℃雜交過(guò)夜(根據雜交情況可以調節)。
9.雜交后洗滌:揭掉蓋玻片,37℃左右水溫的2×SSC洗滌5分鐘×2次;37℃0.5×SSC洗滌15分鐘×1次; 37℃0.2×SSC洗滌15分鐘×1次(如果有非特異性染色,重復0.2×SSC洗滌15分鐘×1-2次)。
10.滴加封閉液:37℃30分鐘。甩去多余液體,不洗
11.滴加化鼠抗*:37℃ 60分鐘或室溫120分鐘。原位雜交用PBS洗5分鐘×4次。勿用其它緩沖液和蒸餾水洗滌。
12.滴加SABC:37℃20分鐘或室溫30分鐘。原位雜交用PBS洗5分鐘×3次。勿用其它緩沖液和蒸餾水洗滌。
13.滴加化過(guò)氧化物酶:37℃20分鐘或室溫30分鐘。原位雜交用PBS洗5分鐘×4次。
14.DAB顯色:使用DAB顯色試劑盒—1ml蒸餾水加顯色劑A,B,C各一滴,混勻,加至標本上。一般顯色20-30分鐘。若無(wú)背景出現則可繼續顯色。也可自配DAB顯色劑后顯色。充分水洗。
15.必要時(shí)蘇木素復染,充分水洗。
16.酒精脫水,二甲苯透明,封片。
注意事項:
①加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說(shuō)明書(shū)中標明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應揮發(fā),避免長(cháng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對光敏感,避免長(cháng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗完成后應立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標板時(shí)應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器。
⑦實(shí)驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應按標簽說(shuō)明書(shū)儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過(guò)后的標準品應丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
粘蛋白/粘液1(MUC1)英文名稱(chēng):MUC1 ELISA Kit血管生成相關(guān)蛋白6抗體包裝1g
再生基因蛋白1a(REG-1a)英文名稱(chēng):REG-1a ELISA KitMuellerian繆勒管激抑制因子抗體包裝5g
載脂蛋白H(Apo-H)英文名稱(chēng):Apo-H ELISA Kit酪蛋白激受體A8抗體包裝1g
載脂蛋白E(Apo-E)英文名稱(chēng):Apo-E ELISA Kit脂肪酰家族成員1抗體包裝5g
載脂蛋白B48(apo-B48)英文名稱(chēng):apo-B48 ELISA Kit芳香烴受體核轉錄蛋白樣2抗體包裝100mg
載脂蛋白B100(apo-B100)英文名稱(chēng):apo-B100 ELISA Kit磷化芳香N-乙?;D移抗體包裝1g
載脂蛋白B100(Apo B100)英文名稱(chēng):Apo B100 ELISA Kit肌動(dòng)蛋白結合蛋白1抗體包裝500mg
載脂蛋白B(ApoB)英文名稱(chēng):ApoB ELISA Kit粘附分子IgG樣結構域蛋白2抗體包裝5g
載脂蛋白A5(apo-A5)英文名稱(chēng):apo-A5 ELISA Kit肌動(dòng)蛋白結合蛋白DOC6抗體包裝100mg
載脂蛋白A1(apo-A1)英文名稱(chēng):apo-A1 ELISA KitAFG3樣蛋白2/脊髓小腦共濟失調蛋白28抗體包裝500mg
載脂蛋白A1(Apo A1)英文名稱(chēng):Apo A1 ELISA Kit激活受體相互作用蛋白1抗體包裝1g
孕受體(PROGR)英文名稱(chēng):PROGR ELISA Kit固類(lèi)還原家族7成員A2抗體包裝5g
孕(PROG)英文名稱(chēng):PROG ELISA Kit蛋白激AKT1,2,3抗體包裝25g
孕激/孕(PROG)英文名稱(chēng):PROG ELISA Kit帕金森病相關(guān)蛋白ATP13A2抗體包裝5g
誘導型一氧化合成(iNOS)英文名稱(chēng):iNOS ELISA Kit肌側索硬化蛋白2抗體包裝100g
繆勒激2型受體抗體Ⅱ型膠原(COL2)AT-406 是一種有效的,可口服的 Smac 模擬物,為 IAPs 的拮抗劑,能夠抑制 XIAP,cIAP1 和 cIAP2 蛋白,Ki 值分別為 66.4,
細胞凋亡DNA Ladder提取試劑盒(柱式吸附)空泡單胞 N-2-乙?;B(niǎo)Ⅰ型前膠原羧基端肽Elisa
都柏林沙門(mén)氏 肝瓊脂糖凝膠CL-6BⅡ型肺泡表面抗原Elisa
畢赤酵母屬 聚氧乙烯氫化Ⅱ型膠原C端肽Elisa
枯草芽孢桿 (-)-莰Ⅱ型膠原抗體Elisa
肉座屬 牛肉浸粉Ⅲ型膠原蛋白Elisa
少根根霉 油酸乙酯Ⅲ型前膠原氨基端肽Elisa
大腸埃希氏○抗原微量凝集定型血清診斷液 ○106 3'-甲氧基-5'-羥基異黃酮-7-O-β-D-葡萄糖苷Ⅳ型膠原Elisa
釀酒酵母 Ⅳ型膠原蛋白Elisa
殼多胞屬 鼠尾草酸Elisa
粗壯假絲酵母 蜂膠Ⅸ型膠原蛋白Elisa
運動(dòng)節桿 甲基紫精adropinElisa
枯草芽孢桿 月桂聚氧乙烯硫酸鈉AKT蛋白Elisa
Pseudomonas argentinensis DA201-C樹(shù)脂AP2A2Elisa
馬腺疫鏈球獸疫亞種 1,1-二苯基-2-苦基肼脂肪炎癥因子Elisa
枯草芽孢桿 長(cháng)春apelin 12Elisa