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產(chǎn)品分類(lèi)
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產(chǎn)品名稱(chēng):胃腸道間質(zhì)瘤細胞
英文簡(jiǎn)稱(chēng):GIST-48細胞
貨號:LZ-X969971
規格:T25
生長(cháng)特性:貼壁
凍存培養基:
凍存細胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養基。凍存培養基中應含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專(zhuān)門(mén)配制的*凍存培養基。
1)細胞凍存培養基是一種用于哺乳動(dòng)物細胞的即用型*凍存培養基,其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過(guò)優(yōu)化,可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果。
2)凍存培養基是一種化學(xué)成分確定的、無(wú)蛋白、無(wú)菌凍存培養基,含10% DMSO,適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。
培養細胞凍存方案:
以下實(shí)驗方案介紹了培養細胞凍存的一般流程。詳細的實(shí)驗方案,必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)。
1.配制凍存培養基,于2°C至8°C下儲存,直至使用。請注意使用何種凍存培養基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時(shí),利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細胞從組織培養容器上脫離下來(lái)。用該細胞所需*培養基重新懸浮細胞。
3.采用、細胞計數儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動(dòng)細胞計數儀測定總細胞數和活細胞百分比。根據所需活細胞密度,計算凍存培養基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無(wú)菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動(dòng)細胞沉淀。
注:離心速度和時(shí)間取決于細胞種類(lèi)。
5.用預冷的凍存培養基重新懸浮細胞沉淀,將其調整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí),應不時(shí)輕輕混合細胞,使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞,使溫度每分鐘大約降低 1°C?;蛘?,將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過(guò)夜。
實(shí)驗材料:
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養液1瓶;8ml小牛血清(FCS) 1瓶;100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶;PBS(-)1 瓶
2. 100ml滅菌燒杯2個(gè);
3、50ml離心筒2個(gè)
4、滅菌培養皿1個(gè),細胞培養瓶1個(gè)
5、1ml ,200μl移液器各1支;槍頭盒2個(gè);無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè)
6、細胞計數板1塊;
7、滅好菌的鑷子1把,剪刀1把;
8、酒精燈1臺;
實(shí)驗報告:
一、分離與培養:
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;
5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實(shí)驗需要接種于6孔板中繼續培養;
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長(cháng)至80%融合時(shí),棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過(guò)夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微
鏡下觀(guān)察圖像并拍照。
抗酸染色液(金O熒光法)DAPT;(2S)-N-[N-(3,5-二氟苯乙?;?-L-氨酰]-2-苯基甘氨酸叔丁酯精氨酸(arginine)含量酶連續循環(huán)反應比色法定量檢測試劑盒
抗酸染色液(金O熒光法)DAPT;(2S)-N-[N-(3,5-二氟苯乙?;?-L-氨酰]-2-苯基甘氨酸叔丁酯抗壞血酸比色法定量檢測試劑盒
抗酸染色液(金O-羅丹明熒光法)DAPT;(2S)-N-[N-(3,5-二氟苯乙?;?-L-氨酰]-2-苯基甘氨酸叔丁酯抗酸性磷酸酶(TRAP)活性染色試劑盒
抗酸染色液(金O-羅丹明熒光法)Daptomycin;達托霉素科薩基病A(Coxsackievirus A)定量PCR擴增檢測試劑盒
布氏桿菌染色液Daptomycin;達托霉素科薩基病A(Coxsackievirus A)定性檢測試劑盒
布氏桿菌染色液Daptomycin;達托霉素科薩基病B(Coxsackievirus B)定量PCR擴增檢測試劑盒
Ehrlich試劑Daucosterol;胡蘿卜苷科薩基病B(Coxsackievirus B)定性檢測試劑盒
Ehrlich試劑Daucosterol;胡蘿卜苷可溶性總蛋白制備試劑盒
Kovac試劑Daucosterol;胡蘿卜苷可溶性總蛋白制備試劑盒
Kovac試劑10-Deacetylbaccatin III;10-脫乙酰巴卡亭可溶性總核蛋白制備試劑盒
幽門(mén)螺旋桿菌染色液(亞甲藍法)10-Deacetylbaccatin III;10-脫乙酰巴卡亭可溶性總核蛋白制備試劑盒
Warthin-Starry銀染色液10-Deacetylbaccatin III;10-脫乙酰巴卡亭賴(lài)氨酸(lysine)含量高效液相色譜法定量檢測試劑盒
幽門(mén)螺旋桿菌染色液(MGG法)Decitabine;地西他濱/ 5-氮雜-2'-脫氧胞嘧啶核苷賴(lài)氨酸(lysine)含量化學(xué)比色法定量檢測試劑盒
乙型肝炎病染色液(Shikata地衣紅法)Decitabine;地西他濱/ 5-氮雜-2'-脫氧胞嘧啶核苷賴(lài)氨酸(lysine)含量熒光定量檢測試劑盒
乙型肝炎病染色液(Gomori品紅法)Decitabine;地西他濱/ 5-氮雜-2'-脫氧胞嘧啶核苷賴(lài)氨酸羥化酶(lysyl hydroxylase)活性比色法定量檢測試劑盒
GIST-48細胞血小板因子4(PF4)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Human SECTM1(Secreted and transmembrane protein 1) ELISA Kit羥脯氨酸抗體
硫酸軟骨素(CS)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human PGS1(CDP-diacylglycerol–glycerol-3-phosphate 3-phosphatidyltransferase, mitochondrial) ELISA Kit熱休克蛋白10抗體
血漿抗凝蛋白C(PC)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human Securin/PTTG1 ELISA Kit同源盒蛋白PRH抗體
α1酸性糖蛋白(α1-AGP)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Human SELK ELISA Kit羥類(lèi)固脫氫酶17β抗體
磷脂酶C(PLC)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human SEMA3C ELISA Kit皰疹病相關(guān)泛素特異性蛋白酶7抗體
酪氨酸酶(TYR)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Human SDHC ELISA Kit同源異型盒基因HOXA5蛋白抗體
白介素9(IL-9)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒Human SDHB ELISA Kit異染色質(zhì)蛋白1-α(HP1α)抗體
注意事項:
盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復凍融5次對于其檢測效果無(wú)顯著(zhù)影響,但為取得良好的使用效果,3-6個(gè)月內推薦4℃保存,并適當注意避免反復凍融。
如果有細菌或真菌污染,會(huì )嚴重影響檢測效果。
染色后宜盡快檢測,時(shí)間過(guò)長(cháng)可能會(huì )導致凋亡或壞死細胞的數量增加。
如果細胞收集過(guò)程中使用了胰酶,需注意設法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會(huì )消化并降解Annexin V-FITC,導致染色失敗。
熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅,在進(jìn)行熒光觀(guān)察時(shí),盡量縮短觀(guān)察時(shí)間,同時(shí)在操作和存放過(guò)程中也盡量注意避光保存。
用于流式細胞儀檢測時(shí),如果發(fā)現Annexin V-FITC單獨染色時(shí)出現了過(guò)多的PI假陽(yáng)性細胞,并且通過(guò)調整相關(guān)設置和參數也無(wú)法改善,可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測,這樣通??梢杂行p少假陽(yáng)性的壞死細胞。
需自備PBS。
本產(chǎn)品于專(zhuān)業(yè)人員的科學(xué)研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內。
為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。